Evaluation of three commercially-available chikungunya virus immunoglobulin G immunoassays / Evaluación de tres inmunoensayos comercializados de inmunoglobulina G para el diagnóstico del virus del chikungunya

ABSTRACT The emergence of chikungunya virus in the Americas means the affected population is at risk of developing severe, chronic, rheumatologic disease, even months after acute infection. Accurate diagnostic methods for past infections are essential for differential diagnosis and consequence management. This study evaluated three commercially-available chikungunya Immunoglobulin G immunoassays by comparing them to an in-house Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay conducted by the Centers for Disease Control and Prevention (Atlanta, Georgia, United States). Results showed sensitivity and specificity values ranging from 92.8% - 100% and 81.8% - 90.9%, respectively, with a significant number of false-positives ranging from 12.5% - 22%. These findings demonstrate the importance of evaluating commercial kits, especially regarding emerging infectious diseases whose medium and long-term impact on the population is unclear.(AU)

RESUMEN Como consecuencia de la aparición del virus del chikungunya en las Américas, la población afectada corre el riesgo de padecer reumatismos crónicos graves, aun meses después de la infección aguda. Es fundamental contar con métodos precisos para diagnosticar los antecedentes de la infección a fin de elaborar un diagnóstico diferencial y abordar las manifestaciones de la fase crónica. Se han estudiado tres inmunoensayos comercializados de detección de inmunoglobulinas G para el diagnóstico del chikungunya, comparándolos con el enzimoinmunoanálisis de adsorción (ELISA) propio. Los resultados señalan valores de sensibilidad del 92,8% al 100% y de especificidad del 81,8% al 90,9%, así como un número significativo de falsos positivos, de entre el 12,5% y el 22%.(AU)

Introducción del método inmunocitoquímico de la fosfatasa alcalina-antifosfatasa alcalina para la clasificación inmunológica de los Síndromes Linfo y Mieloproliferativos Agudos / Introduction of the alkaline phosphatase-alkaline antiphosphatase immunocytochemical method for the immunological classification of the acute lympho-and myeloproliferative syndromes

Se realizó el inmunofenotipaje celular en 30 pacientes con el diagnóstico de síndromes linfo y mieloproliferativos agudos por el método inmunoenzimático fosfatasa alcalina-antifosfatasa alcalina (APAAp) introducido en nuestro laboratorio. Los marcadores estudiados fueron: CD3, CD5, CD7, CD10, CD13, CD15, CD22, CD33, CD34 y CD41 mediante los anticuerpos monoclonales correspondientes, según cada caso. De las leucemias agudas, 16 resultaron ser leucemias linfoides (LLA) (53,3 %) y 12 mieloides (LMA) (40 %). Entre las LLA, el 50 % fue del fenotipo B y del resto, 1 caso del tipo T (LLA-T) (3,33 %). Un paciente se diagnosticó como leucemia aguda híbrida (LAH) (3,33 %) y el otro se clasificó como leucemia aguda indiferenciada (LAI) (3,33 %). Se concluye que el APAAP es un método más rápido y tan eficaz como otros métodos enzimáticos para la clasificación inmunológica de los síndromes linfo y mieloproliferativos.

The cellular immunophenotyping was carried out in 30 patients with the diagnosis of acute lympho- and myeloproliferative syndromes by the alkaline phosphatase-alkaline antiphosphatase immunoenzimatic method (APAA) introduced in our laboratory. The CD3, CD5, CD7, CD10; CDl3, CDl5, CD22, CD33 and CD41 markers were studied by using the corresponding monoclonal antibodies, according to each case. Of the acute leukemias, 16 were lymphoid leukemias (ALL) (53.3 %) and 12 were myeloid leukemias (AML) (40 %). Among the ALL, 50 % were phenotype B and of the rest, 1 case was type T (ALL-T) (3.33 %). A patient was diagnosed acute hybrid leukemia (AHL) (3.33 %) and the other was classified as acute undifferentiated leukemia (AUL) (3.33 %). It is concluded that the APAA is faster and as efficient as other enzimatic methods for the immunologic classification of the lympho- and myeloproliferative syndromes.

Caracterización de los virus de influenza por el método de la inmunoperoxidasa utilizando anticuerpos monoclonales: Montaje y validación

Se aplicó y validó por primera vez en Cuba el método de inmunoperoxidasa para la clasificación rápida en tipo y subtipo de los virus de influenza. El método está basado en un cultivo rápido en células MDCK-L y el empleo de anticuerpos monoclonales para la clasificación en tipo y subtipo. Se utiliza un pool de anticuerpos contra influenza A y otro contra la influenza B y los anticuerpos monoclonales HA1 - 71 y HA2 - 76 para el subtipaje en H1 y H3. La validación se realizó aplicándolo a 21 cepas de referencia internacional y 23 cepas de virus de influenza humana, aisladas y clasificadas previamente por inhibición de la hemaglutinación. Todas las cepas reaccionaron frente a los anticuerpos monoclonales en correspondencia con su tipo y subtipo de hemaglutinina. Fueron caracterizadas 6 cepas de referencia y 9 aislamientos dentro del subtipo H1N1; 9 cepas de referencia y 10 aislamientos en el subtipo H3N2 y 6 cepas de referencias y 4 aislamientos dentro del tipo B.No hubo reacciones inespecíficas ni cruzadas en los controles establecidos. La sensibilidad, especificidad y coincidencia fue del 100 %. La técnica resultó rápida y conveniente para la caracterización en tipo y subtipo de las cepas de virus de Influenza aisladas. Puede sustituir al método clásico de inhibición de la hemaglutinación cuando se requiere la caracterización rápida de brotes o epidemias de infecciones respiratorias agudas, lo que es de extrema importancia por ser éstas causantes de una alta morbilidad, fundamentalmente en grupos de riesgo, y por su repercusión económica.

The immunoperoxidase method for the rapid classification of influenza viruses in type and subtype was applied and validated for the first time in Cuba. The method is based on a rapid culture in MDCK-L cells and on the use of monoclonal antibodies for the classification in type and subtype. A pool of antibodies against influenza A and another against influenza B and HA1-71 and HA2-76 monoclonal antibodies are used for the subtyping in H1 and H3. The validation was carried out by applying this method to 21 international reference strains and to 23 human influenza virus strains that were isolated and previously classified by hemagglutination inhibition. All the strains reacted to the monoclonal antibodies according to their hemagglutinin type and subtype. 6 reference strains and 9 isolations were characterized within the H1N1 subtype: 9 reference strains and 10 isolations in the H3N2 subtype; and 6 reference strains and 4 isolations in type B. There were neither unspecific nor crossed reactions among the controls established. There was 100 % of sensitivity, specificity and coincidence. The technique used proved to be fast and convenient for the characterization in type and subtype of the isolated influenza virus strains. It may substitute the classic hemagglutination inhibition method when it is required the rapid characterization of outbreaks or epidemics of acute respiratory infections, which is very important due to the high morbidity they cause mainly in risk groups and to their economic repercussion.